孔雀石绿是一种有毒的三苯甲烷类人工合成有机化合物，可用作染料、消毒剂，长期过量使用可致癌。近年来，多家食药监管部门在对苦丁茶进行检测时发现了非法添加孔雀石绿染色的情况，年9月，市场监管总局批准发布了《BJS06苦丁茶中孔雀石绿的测定》食品补充检验方法，填补了目前国内苦丁茶基质中孔雀石绿检测方法的空白。
参照《BJS06苦丁茶中孔雀石绿的测定》，使用CNWdSPE萃取管、CNWQuEChERS净化管以及AthenaC18-WP液相色谱柱，结合内标法测定了苦丁茶基质中孔雀石绿和隐性孔雀石绿的含量，该方法回收率高、精密度好，可以满足国标要求。
样品前处理
称取2g试样（精确至0.g）于50mL聚丙烯离心管中，准确加入μL混合内标中间液，再加入10mL水，涡旋混匀30s，浸泡30min。加入15mL乙酸-乙腈溶液，涡旋提取1min，再加入CNWdSPE萃取管（SBEQ-CA-BZ），盖上离心管盖，剧烈震摇1min，r/min离心5min，吸取2mL上清液加到CNWQuEChERS净化管（SBEQ-CA-25）的15mL离心管中，涡旋混匀1min，r/min离心5min，取上清液过0.22μm有机相微孔滤膜，滤液供液相色谱-串联质谱仪测定；其中3个加标水平分别为：7.5μg/kg、15μg/kg、75μg/kg。
仪器条件
液相色谱条件
a）色谱柱：AthenaC18-WP，4.6mm*mm，5um，（PN：LAEQ-）；
b）柱温：30℃；
c）流速：0.80mL/min；
d）进样量：10μL；
e）流动相：A：含0.1%甲酸的5mM/L乙酸铵水溶液，B：乙腈；
表1、液相色谱梯度洗脱条件
质谱条件
a）液相色谱-质谱联用仪API；
b）离子源：电喷雾离子源(ESI)；
c）检测方式：多反应监测(MRM)；
d）扫描方式：正离子模式；
e）离子源温度：℃；
表2、待测目标化合物定性、定量离子对及电压参考条件
实验谱图
图1、混合标准溶液（10.0ng/mL）谱图
图2、苦丁茶基质空白谱图
图3、苦丁茶基质中水平加标（15ug/kg）谱图
*由于数据较多，仅罗列部分谱图展示
实验数据
表3、苦丁茶基质三水平加标回收率
实验结论
安谱实验参照标准《BJS06苦丁茶中孔雀石绿的测定》，开发验证了苦丁茶中孔雀石绿的应用方案，实验结果表明，苦丁茶中孔雀石绿和隐性孔雀石绿加标回收率均在90%-%，回收率高，RSD10%，精密度好，符合标准对苦丁茶中孔雀石绿的测定要求。
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